Laboratorio Finca España

Manejo de Muestras

Microbiología

El valor de los cultivos microbiológicos depende en gran parte de cómo se toma, se guarda y se envía la muestra. La pérdida del agente etiológico suele ser porque el medio de transporte o las técnicas de conservación son inadecuados. Las muestras se deben obtener antes de iniciar el tratamiento antibiótico. Cuando esto no es posible, se obtendrán justo antes de la administración de la dosis del antimicrobiano, o tras 48 horas de finalizado el tratamiento.

Los viales, tubos o frascos donde se colocan las muestras deben ser estériles con tapón hermético.

Nunca enviar fluidos u otras muestras en tubos con EDTA, ya que el EDTA es muy tóxico para las bacterias. Cuando empleamos una torunda es importante obtener una muestra suficiente, ya que los organismos existentes en la torunda son menos que los existentes en el tejido y puede que se pierdan algunos de los organismos más lábiles durante el transporte de la muestra.

Indicar el tejido del que se ha recogido la muestra, ya que según el origen, un agente infeccioso puede ser más significativo que otro, además de requerir unos medios de cultivos u otros. Especificar las pruebas que se quieren realizar y los patógenos de los que se sospecha, particularmente en muestras que contengan flora saprófita (heces, contenido intestinal, piel o membranas mucosas).

Abscesos: la toma de la muestra debe ser los más aséptica posible, limpiar la zona antes de realizar la punción y realizar el aspirado de las zonas más profundas del absceso. Si no hay suficiente líquido para aspirar se puede introducir un poco de suero fisiológico estéril y aspirar todo el contenido introducido. Enviar la muestra en un tubo estéril y con tapa. Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse sólo en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por otros métodos. Mantener a temperatura ambiente hasta el momento del envío.

Raspado de piel: para cultivo bacteriano se debe raspar la piel no arrancar los pelos. El raspado se debe realizar siempre con guantes desinfectados con alcohol. Se debe realizar en el borde de la lesión, ya que es la zona activa y hay que raspar hasta que sangre. Para cultivo bacteriano evitar el empleo de aceite de parafina como medio de fijación. Depositar el material del raspado y la cuchilla en un envase estéril.

Pelos para el cultivo de dermatofitos: Es necesario lavar la zona con alcohol antes para así eliminar a los hongos saprófitos. Conviene arrancar los pelos de raíz en la dirección de crecimiento del pelo y tomar la muestra en el borde de la lesión. La mejor muestra son los pelos fluorescentes a la lámpara de Word. Enviar la mayor cantidad de muestra que sea posible. En el envío evitar las bolsas de plástico y los tubos tapados porque la humedad hace que los hongos saprofitos proliferen rápidamente, es mejor introducir la muestra en un tubo de plástico tapado con algodón ajustado.

El aislamiento e identificación de algunos agentes micóticos requiere a menudo un tiempo considerable y no se deben esperar los resultados antes de los 21 días, e incluso algunos organismos pueden requerir alrededor de 30 días.

Líquidos biológicos (pleural, peritoneal, articular): la toma de muestra como ya hemos dicho ha de ser lo más estéril posible, realizando una limpieza profunda antes de tomarla. Para el estudio bacteriano rutinario es suficiente de 1 a 10 ml. Cuando se requiera la investigación de Micobacterias. u hongos se enviará un volumen superior a 10 ml siempre que sea posible. Si es necesario evitar la coagulación de algunos de estos líquidos se usará heparina sin conservantes, debe agregarse heparina estéril en caso de grandes volúmenes de líquido pleural y peritoneal (1/2 cm por 100ml de muestra para prevenir que los coágulos atrapen a los microorganismos), nunca usar EDTA ya que es muy tóxico para los microorganismos.

El antibiograma se efectúa en aquellos cultivos donde ha habido un crecimiento suficiente, bajo condiciones de calidad controladas y que se consideran que contribuyen a la enfermedad. Las muestras obtenidas de animales bajo tratamiento puede que no den resultados satisfactorios por algún grado de supresión del organismo.

Orina

Sea cual sea el método de recogida (sondaje, cistocentesis), el objetivo es minimizar la flora normal y la ambiental.

Por esto la extracción debe ser lo más estéril posible, usar siempre guantes, nunca reutilizar las sondas, desinfectar bien antes de realizar la cistocentesis, no enviar orina recogida de la mesa de exploración o del suelo y nunca recoger la orina que haya caído fuera del recipiente.

Una vez extraída la orina se deposita en un recipiente estéril destinado para ello y debe mantenerse en nevera, ya que en si misma es un caldo de cultivo, y enviarse lo antes posible al laboratorio para su procesamiento.

Enviar un volumen de unos 5-10 ml es suficiente y el envío debe hacerse refigerado a unos 4ºC, ya que el número de bacterias presente en la muestra en el momento de la toma es indicativo de infección urinaria y hay que evitar su multiplicación durante el transporte, y en un tiempo máximo de 12 horas. Además se debe informar en el formulario de la técnica de extracción utilizada.

Heces

Preferiblemente, las muestras fecales deben ser recogidas del recto, y si esto no es posible, se debe recoger la parte superior de heces recién depositadas. El recipiente estéril debe ser boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra (ejemplo: frasco de urocultivos). La muestra de heces se recoge con espátula o bajalenguas. Se debe enviar las heces de tres días consecutivos, hasta su envío se guardan en nevera sin añadirles formol. No congelar nunca una muestra de heces.

PCR

La PCR es una técnica capaz de generar “in vitro” grandes cantidades de un fragmento determinado de ADN a partir de cantidades mínimas del mismo. Entre los diferentes problemas que pueden aparecer al utilizar la técnica de PCR, el proceso de extracción y la contaminación tienen especial relevancia.

La aparición de amplificaciones inespecíficas puede complicar la interpretación de los resultados obtenidos. Debido a la gran sensibilidad de la técnica para detectar DNA, es necesario mantener un control estricto en la extracción y manejo de la muestra. Cada técnica tiene un tipo de muestra, o varios, a partir de los cuales se puede extraer el ADN, éstas están especificadas en el catálogo de pruebas.

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